技术专栏

MRSA耐甲氧西林金葡菌检测拭子取样方法

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是一种特殊的葡萄球菌,经常出现在人体皮肤或鼻孔中,不会对人体造成伤害。但是,如果这些细菌从开放性伤口进入,就会引发感染。大多数葡萄球菌感染是轻微的,可以用抗生素治疗。然而,MRSA 细菌对普通抗生素有抗药性,导致其肆意生长--这种现象被称为抗生素耐药性。这种抗药性使治疗变得复杂,导致美国每年有近 300 万例感染和超过 35,000 例死亡。

MRSA antimicrobial susceptibility testing in petri dish

MRSA 最初流行于医院,现在在健康人中无处不在。它可以通过个人接触或与受污染物体的相互作用传播。它在宿舍或更衣室等拥挤的环境中尤为流行。MRSA 的鉴定是通过检测分析伤口、鼻孔或其他体液样本来完成的。如果不及时治疗,MRSA 感染可能会发展成重症或死亡,但可以使用强效抗生素进行治疗。

我们将深入探讨如何进行检测,以及医生如何利用这种检测来识别和管理这种具有挑战性的病原体。敬请关注,全面了解这一过程。

采集 MRSA 拭子样本的说明

在采集 MRSA 鼻腔、咽喉和腹股沟拭子进行检测时,请仔细遵循以下步骤说明。

采集拭子前

- 用肥皂和水彻底清洗双手。

- 准备所需材料:拭子包、运送管、患者标签、生物危险袋。

鼻咽样本采集:

1. 打开鼻咽拭子包,取出拭子。

2. 将拭子顶端插入一个鼻孔,对着鼻黏膜轻轻旋转。

3. 使用相同的棉签在第二个鼻孔重复上述操作。

4. 将拭子插入输送管,在断点处折断拭子轴。

咽喉样本采集:

1. 打开口咽拭子包,取出拭子。

2. 将口咽拭子尖端插入咽后和扁桃体区域并轻轻旋转。

3. 将口咽拭子插入输送管,在断点处折断咽拭子杆。

腹股沟拭子:

1. 打开腹股沟拭子包,取出拭子,只处理拭子轴。

2. 擦拭腹股沟褶皱处的皮肤,旋转棉签尖端数次。

3. 将拭子插入运输管,在断点处折断拭子轴。

采集后:

- 在所有运送管上贴上患者身份标签。

- 将运送管放入生物危险袋中进行处理。

- 适当丢弃用过的拭子包。

MRSA 筛查试验

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)已成为全球医疗相关感染的主要原因。MRSA 指的是对β-内酰胺类抗生素(包括青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类)具有耐药性的金黄色葡萄球菌菌株。这种耐药性是由 mecA 基因介导的,该基因编码一种改变的青霉素结合蛋白 PBP2a,它对这些抗生素的亲和力较低,即使在有β-内酰胺存在的情况下也能合成细胞壁。

在临床实验室环境中准确检测 MRSA 对于选择适当的抗生素治疗和制定有效的感染控制措施至关重要。然而,由于可能存在异抗性,即在一个分离物中可能同时存在具有不同敏感性的亚群,因此确定甲氧西林耐药性具有挑战性。因此,要对 MRSA 菌株进行可靠的表型鉴定,就必须按照标准协议采用谨慎的检测方法。

检测理论

由于细菌培养物中可能存在异质性,准确检测金黄色葡萄球菌对甲氧西林的耐药性十分困难。当同一分离物中同时存在耐药细胞亚群和易感细胞亚群时,就会出现这种现象,即异抗性。

与易感细胞相比,耐甲氧西林亚群的生长速度较慢。如果检测条件没有优化,生长速度较快的易感细胞可能会超过耐药细胞,从而导致假阴性结果。有几个因素会导致这种检测难题:

- 培养温度:抗性细胞在 33-35°C 的温度下生长得更好。更高的温度有利于易感细胞的生长。检测方案必须坚持 33-35°C 的孵育温度,以便进行可靠的检测。

- 诱导剂的选择:与氧青霉素相比,头孢西丁是更好的 mecA 表达诱导剂。它是最佳的替代标记物,应纳入检测程序。

- 培养时间:培养 24 小时可使生长较慢的耐药亚群充分生长。缩短培养时间有可能错过耐药性的表达。

完整的 MRSA 检测实验程序

1. 分离纯菌落:从培养板中获取分离良好的金黄色葡萄球菌菌落,制备标准细胞悬液进行检测。

2. 制备细胞悬液:将分离菌制成悬浮液,调整至 0.5 McFarland 浑浊度标准,以达到近似均匀的接种密度,供测试使用。

3. 接种测试板:将标准悬浮液接种到含有头孢西丁片的穆勒-欣顿琼脂试板上。在琼脂中加入 4% 的 NaCl。用无菌棉签将接种物均匀分布于平板的整个表面。

4. 培养平板:将接种过的平板倒置,在 33-35°C 下培养 24 小时,以便异抗亚群生长。

5. 评估生长情况:检查平板上头孢西丁盘周围是否存在抑制区。无抑菌区表示耐甲氧西林(MRSA)。如果存在,测量抑制区直径。

6. 确认:检测 如果表型结果不明确,则进行确证检测,如 mecA PCR。

文章为麦瑞科林原创,转载请注明文章链接和出处。

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