1. 血液标本
采集血液进行培养时需要格外小心。许多微生物, 特别是葡萄球菌和丙酸杆菌, 通常存在于皮肤表面或附近, 很容易污染标本。
采集血液标本时, 请按以下步骤进行静脉穿刺:
(1) 首先, 用70%酒精(用无菌蒸馏水配制)清洁静脉穿刺部位的皮肤。
(2) 然后, 用碘酊擦拭。对碘过敏的患者, 再次使用70%酒精, 确保从中心向外擦拭。
(3) 用浸有70%酒精的棉球暂时覆盖该区域。
(4) 在上臂施加止血带, 不要太紧, 并要求患者反复握拳和松开。
(5) 移除棉球, 使用20或21号针头和10ml注射器抽取10ml血液。对于婴儿或儿童, 只抽取1-5ml。
(6) 将标本直接接种到适当的培养基中[如胰蛋白胨大豆肉汤和硫乙醇酸盐培养基或标准血液培养瓶]。
2. 尿液标本
尿液标本通常采用清洁中段尿法收集。采集前, 应用肥皂和水清洁尿道口(需要对患者进行教育;目前, 大多数主要医院并不强调这一尿液采集要求)。丢弃尿流的第一部分, 在无菌容器中收集中段或接近末段的尿液。除非必要, 应避免导尿采集尿液(尤其是女性患者), 因为这可能导致尿路感染。必须在实验室表格上注明采集方法, 以及最近是否使用过抗生素。这两点应该包含在检验申请单上。如果标本在采集后无法立即运送或培养, 应冷藏(4-8°C)不超过6小时。尿液标本不用于淋病检测。
3. 生殖道标本
生殖道标本应使用两根无菌拭子分别采集, 用于直接涂片制备。对于月经期或成年女性, 应从尿道、宫颈或直肠(如果怀疑淋病感染)采集涂片。对于疑似患有淋球菌外阴阴道炎的年轻女孩, 应从外阴区域采集标本。对于疑似急性淋病的男性, 应从尿道采集标本进行涂片和培养。对于疑似慢性淋病, 医生可能会从前列腺或精囊采集标本。
拭子标本可以直接接种到适当的培养基上[如巧克力琼脂和改良Thayer-Martin琼脂], 或放入特殊的运输培养基/装置中(含CO2和改良Thayer-Martin琼脂)。使用前应将冷藏的分离或运输培养基放置在室温或35°C下约半小时, 因为淋病奈瑟菌对温度敏感。巧克力琼脂应含有IsoVitaleX或补充剂B以提高分离率。对于妊娠35-37周的B族链球菌(GBS)产前筛查, 可将生殖道拭子直接放入GBS选择性肉汤或LIM选择性富集肉汤中以提高GBS分离率。
4. 脑脊液(CSF)标本
脑脊液通常通过腰椎穿刺获得, 由医生按以下步骤进行:用70%酒精或2%碘酊(与血液标本采集相同)消毒下背部并麻醉。然后沿着中线将特制的带芯针轻轻插入第三和第四腰椎之间的脊髓蛛网膜下腔。整个过程必须在最严格的无菌条件下进行。对于婴儿或儿童, 将头部和手放在折叠的床单或毯子上, 或将头部放在腹部上以便于腰椎穿刺。将脑脊液分配到3个小无菌试管中[使用无菌3管套装CSF比较方便]。然后迅速将第三(或第一)管送到微生物实验室。
5. 粪便标本和直肠拭子标本
对于微生物检查, 粪便可以在排便后直接放入无菌塑料容器中。通常, 含有粘液的粪便部分最适合微生物检查。
采集直肠标本时, 用肥皂、水和70%酒精清洁肛门区域。然后将用无菌生理盐水或液体运输培养基润湿的拭子插入肛门, 旋转以接触直肠粘膜, 然后取出并放入好氧TransCult拭子运输装置(用于沙门氏菌)或含有甘油盐缓冲液运输培养基的容器(用于志贺氏菌)中, 立即送到实验室。有时, 还可以从直肠指检时使用的手套上获取粪便标本。
对于寄生虫学检查, 应将无菌塑料容器中的粪便标本迅速送到实验室进行即时检查, 以便观察仍然温暖的粪便。这一点特别重要, 因为一些寄生虫如阿米巴原虫在粪便冷却后会迅速失去活动能力。如果无法立即检查, 可以将容器放入约37°C的水浴中保持温暖一段时间。
对于粪便拭子或肛拭子标本的微生物检查, 快速运输和接种至关重要。延迟可能导致非致病性肠道细菌过度生长, 使病原体分离变得困难。
6. 脓液或伤口标本
可以通过引流获得脓肿和疖子的脓液。首先用70%酒精清洁受影响区域, 让其干燥, 然后用无菌刀片切开并用无菌拭子采集标本。对于大面积伤口, 尝试打开表面区域并从较深层采集标本, 以避免表面微生物的污染。采集后, 应立即将拭子放入厌氧标本采集管/装置中[厌氧TransCult拭子]。
脓液或伤口标本通常需要厌氧培养, 因此在采集过程中必须非常小心, 以最大程度减少与空气的接触。最好用注射器直接从病变处吸取标本;如果必须使用拭子, 则将其放入厌氧TransCult拭子培养基中, 或将针头插入硅胶塞中, 或注入厌氧标本采集瓶[厌氧瓶]中, 然后迅速送到实验室进行适当培养基的接种。
7. 鼻腔和咽喉标本
要采集鼻腔标本进行培养, 使用带有硬塑料柄的无菌拭子或植绒拭子[带有密集、刷状尖端]直接插入鼻腔。避免使用可能在患者鼻腔中滑动或卡住的大型松散棉签。对于咽喉标本, 在良好的照明下采集, 使用拭子采样实际病变部位。应至少分别采集两个拭子。采集后, 放入适当的厌氧运输培养基中, 以防止干燥或污染。
当怀疑白喉棒状杆菌感染时, 应同时进行咽喉和鼻咽培养, 以提高分离率。如果咽喉存在类似白喉的病变, 除了培养外, 还应进行直接涂片检查, 因为文森特氏咽峡炎的致病菌与白喉相似, 只能通过涂片检查检测到。
8. 鼻咽标本
鼻咽指的是软腭后方喉咙的上半部分。要从这个区域采集标本, 使用细长、柄部柔软的植绒鼻咽拭子。将其通过鼻腔插入鼻咽部, 轻轻旋转以采样, 然后取出。通过另一个鼻孔重复此过程。采集后, 将其放入上述Amies运输培养基或非灭活病毒保存液中, 并迅速送到实验室。在采集鼻咽标本时必须小心, 避免唾液污染。
9. 痰液标本
通常, 痰液标本采集最容易出错:要么采集量太少, 要么标本只含有口腔、鼻腔或喉咙分泌物, 而没有实际的痰液。采集前, 用牙刷清洁牙齿(如果困难则漱口), 然后排出呼吸道分泌物。采集的样本必须真正代表肺部分泌物。通常, 晨痰最丰富, 最有可能含有病原体, 如结核分枝杆菌或肺炎链球菌。深咳后, 应将痰液放入带有密封盖的无菌塑料容器或无菌离心管中, 以防止自我感染或感染他人。对于分枝杆菌诊断, 应连续3天采集痰液标本, 共3次, 以提高检出率。
儿童经常将痰液吞入胃中, 成人在睡眠时也可能这样做。要从儿童或无法获得满意咳出痰液的成人那里采集痰液, 可以抽取胃内容物, 最好在早晨进食或饮水前进行。对于支气管分泌物的微生物检查, 可以使用支气管镜获取标本。
10. 体液标本
诸如胸腔积液、腹腔积液、心包积液或滑液等体液标本通常由医生使用无菌技术采集。将套管针或专门设计的针头插入采集部位, 用注射器抽取液体。由于所有液体都需要厌氧培养, 采集和运输应避免与空气接触。它们可以直接接种到血液培养瓶中和/或收集在厌氧运输管中。
11. 结膜标本
可以使用用无菌生理盐水润湿的拭子采集结膜标本。必须小心, 避免将感染扩散到邻近的眼部区域。采集后, 应将拭子放入Amies运输培养基或保存液中以防止干燥。注意应标记标本来自左眼还是右眼。
12. 真菌培养标本
要采集皮肤标本, 首先用70%酒精清洁病变区域, 然后使用无菌刀片或玻片边缘从病变边缘刮取标本, 并将其放入无菌培养皿中。指甲标本的采集方法类似, 但需要更深入地刮取新感染的指甲组织。对于头发或头皮鳞屑标本, 可以使用伍德氏灯(紫外线)照射受影响区域, 因为感染区域通常会发荧光。然后, 使用无菌镊子拔取头发或头皮鳞屑, 并将其放入无菌培养皿中。
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